1、管理制度與SOP制定

1.1管理制度

SPF級動物實驗室管理制度主要包括：《濱州醫(yī)學院SPF級動物實驗室動物管理辦法》《SPF級動物實驗室使用管理規(guī)定》《SPF級動物實驗室工作人員管理守則》《實驗室生物安全管理規(guī)定》等，從實驗室管理、行為規(guī)范、環(huán)境質量控制等方面保障屏障環(huán)境達標。同時實驗室制定《實驗動物生物安全應急預案》《實驗室消防安全應急預案》《實驗室水電安全應急預案》等多項應急預案，以保障科研人員的人身安全。

1.2標準操作規(guī)程SOP

兩年來SPF級動物實驗室制定實驗動物飼養(yǎng)及繁育標準操作規(guī)程（SOP）4本，包括《動物實驗標準操作規(guī)程》《SPF級動物實驗室管理制度》《動物飼養(yǎng)及設備設施標準操作規(guī)程》《實驗動物生產管理標準操作規(guī)程》，其中細化規(guī)程56項，包括：實驗操作、分組編號、抓取、處死、采樣等實驗標準操作規(guī)程；SOP管理、采購、登機、消毒、人員物品動物進出、清潔、記錄等管理標準規(guī)程；大小鼠飼養(yǎng)、檢疫、環(huán)境設施檢測、滅菌器操作、IVC使用維護等飼養(yǎng)及設施標準操作規(guī)程；KM、C57BL/6J小鼠、SD大鼠生產飼養(yǎng)、采樣送檢等生產標準操作規(guī)程。

2、屏障系統(tǒng)運行

實驗動物設施是實驗動物居住的環(huán)境，它是用于實驗動物生產、實驗的建筑和設備的總和，也是最基礎的硬件環(huán)境。實驗動物設施環(huán)境按空氣凈化控制程度可以分為普通環(huán)境、屏障環(huán)境和隔離環(huán)境三大類，其中屏障環(huán)境是指符合動物居住的要求，嚴格控制人員、物品和空氣的進出，適用于飼育無特定病原體（SPF）級實驗動物。濱州醫(yī)學院SPF級動物實驗室流程圖如圖1所示，采用三走廊設計，實現了人流、物流、污物流分離，避免對屏障內環(huán)境造成交叉污染。

屏障環(huán)境能夠保持符合國際標準要求的飼養(yǎng)條件離不開各種設備系統(tǒng)的正常運行。對空調系統(tǒng)、IVC系統(tǒng)、高壓滅菌系統(tǒng)、照明系統(tǒng)、飲水系統(tǒng)的維護和檢查是保證動物房內各項指標正常穩(wěn)定最重要的部分。屏障環(huán)境的穩(wěn)定必須定期對動物房內壓差、換氣、塵埃粒子、溫度、濕度、照度進行監(jiān)測；對IVC送風、排風，進行定期檢查；定期清潔IVC送排風管的粉塵，更換空調初、中、高效過濾器，IVC初效、高效過濾器等。

2.1溫度、濕度、壓差

濱州醫(yī)學院SPF級動物實驗室屏障內溫度區(qū)間為19～24℃，濕度為40%～70%。溫濕度由空調系統(tǒng)自動控制，動物飼養(yǎng)人員及控制室值班人員每天（包括周末及節(jié)假日）記錄。

2.2送排風

屏障環(huán)境的空氣經低效、中效、高效過濾器進入屏障系統(tǒng)，排風通過初效過濾和中效過濾及活性炭后排出設施。屏障內空氣潔凈度達到10000級，風速用風速儀測定，風量用風量罩測定并記錄，設施內的氨濃度不得高于14mg/m3，檢測塵埃粒子數在350/L以內。利用空調送排風系統(tǒng)形成清潔走廊、飼養(yǎng)間、污染走廊、緩沖間、屏障外的靜壓差梯度，壓差控制在10～20Pa，同時人員、動物、物品、污物的走向采用單向流通路線，有效防止空氣逆向形成污染。為保證屏障內空氣質量，空調初效過濾器每月更換2次，中效過濾器每月更換1次，高效過濾器每年更換1次，高效過濾器更換完成后重新調整屏障環(huán)境壓差。

2.3噪音與振動

噪音干擾對實驗動物的生理活動、身體健康具有重要影響。研究表明，噪音干擾通過影響與物質和能量代謝相關的酶的生理活性從而影響新陳代謝速率，長期噪音影響會造成小鼠活動減少、進食量減少、體重下降。同時，噪音影響小鼠的神經系統(tǒng)，造成記憶力下降、學習能力下降、暴躁易怒。因此，控制飼養(yǎng)間內噪音在國家標準以內是保障實驗動物身心健康的重要環(huán)節(jié)。本實驗室墻壁采用隔音材料建設，能有效隔絕外界環(huán)境噪音，日常噪音控制在60分貝以內。同時，規(guī)定飼養(yǎng)間內不得使用手機等通信娛樂設備，要求飼養(yǎng)及實驗操作輕拿輕放，不得大聲喧嘩，減少實驗動物噪音干擾。

2.4消毒與滅菌

屏障內每個房間清潔物品實行專室專用，不得混用，污物必須及時帶出屏障，不得在屏障內存放。每次打開IVC籠盒進行操作后，地面和操作臺用消毒液擦拭消毒。屏障內每天進行日常清掃和地面消毒，每周進行屏障內整體消毒，使用5%苯扎溴銨、3%過氧化氫和84消毒液交替噴霧室內空間、擦拭地面墻面。無動物區(qū)域，如操作間、走廊、緩沖間等每天開啟紫外燈消毒30min。進入屏障內物品需經過嚴格的消毒滅菌處理，否則不得進入屏障環(huán)境。經高壓滅菌的物品如動物籠具、墊料等存放在潔存室內，如超過1周未使用則需重新滅菌。人員進入屏障內必須穿戴無菌隔離服、一次性帽子、口罩、手套，并進行手消毒。使用過的隔離服經清洗高壓滅菌后可重復使用，每進出一次需更換一件隔離服。人、動物、物品都必需遵循從潔凈區(qū)到相對污染區(qū)的單向流動，嚴格按各流程進出屏障環(huán)境。動物飲用水由專門動物純水設備制備，經初級濾芯、納米膜、活性炭過濾罐等過濾后，通過磁能紫外滅菌燈照射并產生臭氧，在一系列消毒滅菌后通過封閉水管直接進入屏障內，在潔存室取水后供動物飲用。

3、日常管理

3.1人員培訓

人員操作不規(guī)范是造成屏障內環(huán)境污染的最主要因素，為避免此類情況的發(fā)生，保證實驗動物質量，加強對從業(yè)人員和實驗人員的培訓管理是必不可少的。由于本校SPF級動物實驗室為開放性實驗平臺，因此實驗室面向全體師生定期舉辦SPF級動物實驗人員培訓。并進行考試和現場培訓，全部通過后辦了門禁卡，進行動物寄養(yǎng)。

3.2物品管理

1）飼養(yǎng)籠具。屏障內飼養(yǎng)籠具為IVC籠具，包括籠底、金屬格柵、籠蓋、生命窗等部分。SPF級動物實驗室IVC籠具生產廠家為：山東省新華醫(yī)療器械股份有限公司。臟籠具在洗消間內進行清洗，洗凈后消毒液浸泡30min，用清水沖洗干凈，晾干。經初步清洗消毒后的籠具通過高壓滅菌的方式（121℃，30min）進入屏障內，存放于潔存室中，使用時轉移至相應飼養(yǎng)間，存放的籠具若超過1周未使用，需重新進行高壓滅菌。

2）飼料墊料。SPF級動物實驗室使用經鈷-60輻照處理后真空（或充氮）包裝的商業(yè)化飼料，墊料使用8目無塵玉米芯墊料，生產廠家為：南京協同醫(yī)藥生物工程有限公司。飼料種類主要包括維持飼料、生長繁殖飼料、免疫缺陷飼料等。飼料的質量必須符合國家標準（GB14925—2010）要求，生產廠家必須提供質量合格證、生產日期、當日批次的輻照證明及權威機構檢測報告，同時每批飼料由獸醫(yī)抽樣送檢，經檢測合格后的飼料方可使用。在倉庫存放要離地離墻，倉庫環(huán)境須保持干燥，注意防蟲、防鼠、防霉變、防化學污染，避免暴露在陽光下。

3.3動物管理

1）實驗動物進出管理

實驗動物進出是影響屏障內環(huán)境的重要因素之一，本校SPF級動物實驗室要求實驗動物必須從具有生產SPF級實驗動物許可資質的單位訂購，同時必須提供合格證明。運輸籠具必須滿足通風、搬運等使用要求，符合SPF級動物標準。動物進入屏障系統(tǒng)前先檢查外包裝是否破損、合格證是否齊全等。檢查無誤后，用75%酒精對動物運輸籠盒進行噴灑并擦拭消毒，再由傳遞窗進行紫外照射（15min）后，進入檢疫觀察室進行驗收。動物在檢疫觀察室內進行飼養(yǎng)檢疫，檢疫期為1～2周，未見異常情況則轉入飼養(yǎng)間進行飼養(yǎng)及實驗。

2）實驗動物日常飼養(yǎng)

飼養(yǎng)員分區(qū)域定量飼養(yǎng)，分工明確。正常實驗動物的墊料、飲水、飼料更換周期為7d，特殊實驗動物如糖尿病小鼠等墊料更換周期為2d，每次完成換籠后清潔臺面、地面。每月更換整體籠具一次，包括籠底、籠蓋、金屬格柵。更換下的臟籠具必須及時移出屏障，當天在洗消間進行清理消毒。飼養(yǎng)員每日記錄飼養(yǎng)籠數、實驗鼠狀態(tài)，飼養(yǎng)間溫度、濕度、壓差，公休日、節(jié)假日輪流值班。飼料放在金屬格柵上以避免沾染排泄物或飲水而潮濕發(fā)霉，剛離乳的仔鼠或特殊情況可放置飼料在玉米芯墊料上以方便取食。成年鼠平均每20g體重每天所需飼料量約為3～5g，飼料投放量依照動物一周內的攝食量給予。

3）實驗動物福利倫理

研究表明，實驗動物的生活環(huán)境、情緒狀態(tài)等因素直接影響到實驗數據的準確性。同時，實驗鼠作為哺乳動物和人類一樣對疼痛等具有深切的感知，隨著實驗動物使用的普及以及醫(yī)學倫理的完善，實驗動物的福利倫理問題越來越受到人們的關注。2018年2月6日國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局和國家標準化管理委員發(fā)布了國家標準GB/T35892—2018《實驗動物福利倫理審查指南》，規(guī)定了國內實驗動物生產、運輸和使用過程中的福利倫理審查和管理要求。相關文件的發(fā)布為保障國內實驗動物福利提供了理論支持，雖然科研人員正越來越重視實驗過程中“3R”原則的實施，但在全球范圍內“3R”原則的影響力仍需進一步提高，動物福利倫理仍需要更多的關注和推廣。

4、結語

總之，實驗動物在高校、科研單位等的教學科研中發(fā)揮了重要的作用。實驗動物的身心健康直接影響到科研數據的準確性和可重復性。實驗動物設施的等級直接影響到實驗動物的質量，關系到科研數據的準確性、可重復性。因此建設標準化動物設施、提高動物福利是保證動物實驗順利進行的基礎。本文以濱州醫(yī)學院SPF級動物實驗室為例，總結探討了動物實驗室日常管理運行方面的內容，為SPF級動物實驗室的標準化管理提供參考。


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